گوانڈائن تھیوسیانیٹ حل کی تیاری میں عام سوالات اور جوابات۔

Guanidine thiocyanate ایک مضبوط پروٹین denaturant ہے۔ یہ نہ صرف تیزی سے پروٹین کو تحلیل کر سکتا ہے ، سیل ڈھانچے کے ٹکڑے ہونے کا باعث بن سکتا ہے ، اور ثانوی ڈھانچے کی تباہی کی وجہ سے نیوکلک ایسڈ سے جوہری پروٹین کو جلدی سے الگ کر سکتا ہے ، بلکہ RNases پر بھی مضبوط ڈینیٹریشن اثر رکھتا ہے۔ لہذا ، گانائڈائن تھیوسیانیٹ کو خلیوں کے لیزینٹ کے طور پر استعمال کیا جاسکتا ہے ، آر این اے کو پروٹین سے الگ کیا جاسکتا ہے ، اور آر این اے کو حل میں چھوڑا جاسکتا ہے۔ تاہم ، گوانڈائن تھیوسیانیٹ حل کی تیاری اور استعمال میں بعض مسائل کا سامنا کرنا پڑتا ہے۔ یہ مقالہ ان مسائل کا ایک ایک کرکے جواب دے گا۔

کیا گوانڈائن تھیوسیانیٹ حل کو ابھی استعمال کرنے اور تیار کرنے کی ضرورت ہے؟

گوانائڈائن تھیوسیانیٹ کی حتمی حراستی مثال کے طور پر 4 میٹر تھی: 42 ملی میٹر سوڈیم سائٹریٹ ، 0.83 n n-Lauryl sarcosine (سوڈیم ڈوڈیسائل ، n-methylglycine) ، 0.2mm β- Mercaptoethanol سے CSB بفر کی تیاری؛ مکمل طور پر تحلیل ہونے تک 25 گرام گانائڈائن تھیوسیانیٹ اور 33 ملی لیٹر CSB بفر حل ملایا جاتا ہے۔ خراب شدہ حل 65 پر گرم اور تحلیل کرکے تیار کیا جاسکتا ہے۔℃ اور 4 پر محفوظ کیا جاتا ہے۔℃ یوز کے لیے.

لہذا، guanidine thiocyanate محلول کو ابھی استعمال اور تیار کرنے کی ضرورت نہیں ہے، اور اس وقت مارکیٹ میں مختلف ارتکاز کے حل موجود ہیں، لیکن ذخیرہ کرنے کا وقت زیادہ لمبا ہونا آسان نہیں ہے، ورنہ بارش ہوگی، جس کی ضرورت ہے۔ استعمال سے پہلے احتیاط سے جانچ پڑتال؛ اس کے علاوہ، اگر ایک بار کی تیاری بہت زیادہ ہے، تو اسے دوبارہ پیک کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

کیا guanidine thiocyanate محلول کو تیاری کے بعد نس بندی کی ضرورت ہے؟

guanidine thiocyanate محلول کو جراثیم سے پاک کرنا ضروری نہیں ہے، جو زیادہ مستحکم نہیں ہے، اور 0.1% DEPC پانی عام طور پر پائرولیسس محلول کے ساتھ استعمال کیا جاتا ہے، اور پانی کو جراثیم سے پاک کر دیا گیا ہے۔ اس کے علاوہ، آر این اے نکالنے کے لیے تمام ریجنٹس کو ڈی ای پی سی پانی سے تیار کرنے کی ضرورت ہے، اور ریجنٹ کو نئے سرے سے کھولا جانا چاہیے اور خصوصی طور پر آر این اے کے لیے استعمال کیا جانا چاہیے۔

اگرچہ تیار شدہ لائسیٹ کو جراثیم سے پاک کرنے کی ضرورت نہیں ہے، لیکن واضح رہے کہ تجربے میں استعمال ہونے والی پلاسٹک کی مصنوعات کو RNase فری نشان زد کیا گیا ہے۔ اگر وہ استعمال کے لیے نہیں کھولے گئے ہیں تو وہ براہ راست استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ دوسروں کا علاج کرنا ضروری ہے: ڈی ای پی سی کو ڈبل ڈسٹل واٹر میں شامل کریں تاکہ اس کا حتمی ارتکاز 0.1 فیصد ہو، پلاسٹک کی مصنوعات کو اس میں بھگو دیں، باورچی خانے کو رات بھر ہوادار رکھیں، اور پھر انہیں ایلومینیم فوائل سے سیل کریں، زیادہ درجہ حرارت اور ہائی پریشر جراثیم سے کم از کم 30 منٹ تک، خشک اور اسٹینڈ بائی.